编号 | 图片 | 名称 | 平台 | 状态 | 操作 |
---|---|---|---|---|---|
166 | ![]() |
第一向等电聚焦系统 | 动物遗传育种研究所公共实验室 | 可用 可预约 | 立即预约 |
仪器编号 | 仪器品牌 | 仪器型号 | 仪器管理员 | 存放位置 | 基本费用 | 每小时费用 |
29 | Bio-Rad | Protein IEF Cell | 刘贺贺 | 6-430 | 0.00 | 0.00 |
操作规范
操作规程:
1. IPG胶条的水化:用样品溶解缓冲液,吸取适量含有样品的水化液放入标准型胶条槽中,为确保样品充分进入胶条中,不要加入过量的水化液。
2. 从酸性端(尖端)一侧剥去IPG胶条的保护膜,胶面朝下,使水化液浸湿整个胶条,并确保胶条的两端与槽的两端的电极接触。
3. IPG胶条上覆盖适量(1.5mL)Immobiline DryStrip覆盖油(从两侧往中间加),盖上盖子。
4. 将标准型胶条槽的尖端背面电极与仪器的阳极平台接触;胶条槽的平端背面电极与仪器的阴极平台接触。
5. 设置IPGphor仪器运行参数:IPG胶条水化的电压,温度和时间;等电聚焦电泳时的梯度电压和温度。
6. IPG胶条水化后可自动进行等电聚焦电泳。
7. IPG胶条的平衡:平衡两次,每次15min。
8. 第一步平衡在平衡液中加入DTT,使变性的非烷基化的蛋白处于还原状态。
9. 第二步平衡步骤中加入碘乙酰胺,使蛋白质巯烷基化,防止它们在电泳过程中重新氧化。
10. 将IPG胶条轻轻润洗,并去除多余的平衡缓冲液,然后放入第二向SDS胶中。
注意事项:
1. 水化液需当天新鲜配制。
2. 暂时不进行第二向的IPG胶条可夹在两层塑料薄膜中于-80°C保存几个月。
3. 不推荐每条IPG胶条的电流超过50μA,因为这有可能产生过多的热量且有可能损坏胶条和槽,IPG胶条甚至会烧胶。
如果缩短平衡时间,会影响一部分蛋白从IPG胶条转移到SDS胶的效率。这种情况下建议在蛋白从 IPG胶条转移到SDS胶后,将IPG胶条染色,以检查是否所有蛋白都已离开IPG胶条。