动物医学院公共实验平台

小麦所公共实验室

营养所公共实验室

农业部西南作物生理生态与耕作重点实验室

中国海洋大学水产科学实验教学中心

中国海洋大学水产科学虚拟仿真实验教学中心

显示全部
编号 图片 名称 平台 状态 操作
166 第一向等电聚焦系统 动物遗传育种研究所公共实验室 可用 可预约 立即预约
仪器编号 仪器品牌 仪器型号 仪器管理员 存放位置 基本费用 每小时费用
29 Bio-Rad Protein IEF Cell 刘贺贺 6-430 0.00 0.00

操作规范

操作规程:

1.     IPG胶条的水化:用样品溶解缓冲液,吸取适量含有样品的水化液放入标准型胶条槽中,为确保样品充分进入胶条中,不要加入过量的水化液。

2.     从酸性端(尖端)一侧剥去IPG胶条的保护膜,胶面朝下,使水化液浸湿整个胶条,并确保胶条的两端与槽的两端的电极接触。

3.     IPG胶条上覆盖适量(1.5mL)Immobiline DryStrip覆盖油(从两侧往中间加),盖上盖子。

4.     将标准型胶条槽的尖端背面电极与仪器的阳极平台接触;胶条槽的平端背面电极与仪器的阴极平台接触。

5.     设置IPGphor仪器运行参数:IPG胶条水化的电压,温度和时间;等电聚焦电泳时的梯度电压和温度。

6.     IPG胶条水化后可自动进行等电聚焦电泳。

7.     IPG胶条的平衡:平衡两次,每次15min。

8.     第一步平衡在平衡液中加入DTT,使变性的非烷基化的蛋白处于还原状态。

9.     第二步平衡步骤中加入碘乙酰胺,使蛋白质巯烷基化,防止它们在电泳过程中重新氧化。

10.  将IPG胶条轻轻润洗,并去除多余的平衡缓冲液,然后放入第二向SDS胶中。

注意事项:

1.     水化液需当天新鲜配制。

2.     暂时不进行第二向的IPG胶条可夹在两层塑料薄膜中于-80°C保存几个月。

3.     不推荐每条IPG胶条的电流超过50μA,因为这有可能产生过多的热量且有可能损坏胶条和槽,IPG胶条甚至会烧胶。

如果缩短平衡时间,会影响一部分蛋白从IPG胶条转移到SDS胶的效率。这种情况下建议在蛋白从 IPG胶条转移到SDS胶后,将IPG胶条染色,以检查是否所有蛋白都已离开IPG胶条。