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编号 图片 名称 平台 状态 操作
149 通用突变检测系统 动物遗传育种研究所公共实验室 可用 可预约 立即预约
仪器编号 仪器品牌 仪器型号 仪器管理员 存放位置 基本费用 每小时费用
12 美国伯乐 变性梯度凝胶电泳(DGGE)1709080 王彦 6-428 0.00 0.00

仪器介绍

操作规范

操作规程:

1. 将提供的TygonTM tubing剪成两个 15.5 cm 和一个9 cm 长的管子,其余部分保存备用。长管子用于连接三通(Y-fitting)和两个分别装高、低浓度胶液的注射器,混合后的变性剂浓度梯度胶通过三通注入灌胶器。

2. 按照光盘演示装配玻璃板,隔条,胶垫,连通配件和灌胶器。平行DGGE、垂直DGGE、CDGE,TTGE的装法略有差异。

3. 按照说明书配制所需变性胶,推荐使用伯乐公司试剂(170-9710,17 -9171,170-9172或分别订货丙烯酰胺等试剂),注意使用新鲜配制的10%过硫酸铵溶液。试剂质量不高会导致凝胶不完全或不均匀。

4. 使用梯度形成仪灌胶。平行DGGE使用Top filling法、垂直DGGE使用bottom filling法,其他灌胶方法同平行DGGE。灌胶器上注明了Top filling和bottom filling两种方法高低浓度注射器摆放位置。

5. 胶凝后,拔出梳子,清洗胶面;装配电泳装置,确保缓冲液无渗漏。

6. 预电泳至缓冲液温度到具体实验要求后,停止电泳,上样后重新开始电泳。DGGE,TTGE,CDGE 使用恒压,SSCP使用恒功率条件电泳。

7. 电泳结束后,EB或银染成像。

8. 实验前请参阅使用说明书和操作光盘,常见问题在TroubleShooting 一章有总结。

注意事项:

1. 每位使用者应该仔细阅读操作说明书和操作演示光盘,在光盘指导下使用。

2. 温度控制模块要垂直方向轻拿轻放并认真放置到位,保护加热棒,搅拌器,泵和探头等部件。

3. 不论是需要暂停还是停止仪器运行,要注意既关闭电泳仪电源也关闭温度控制模块电源,避免加热棒干烧。

4. 即使只跑一块凝胶,也要两边都要用玻璃板形成封闭的上槽。

5. 上槽缓冲液务必没过铂金丝上方 1cm,下槽缓冲液不要超过最大限制高度。

6. 避免反复使用缓冲液。

7. 电泳之前要彻底清洗胶面以获得良好分辨率。

8. 使用后须彻底清洗全部组件并归类摆放,避免丢失小的配件。

9. 玻璃板要避免强酸碱腐蚀;灌胶灰垫等橡胶部件要及时清洗,避免缓冲液腐蚀造成老化。 10. 如果实验过程中出现任何异常现象,请随时联系伯乐公司。