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编号 图片 名称 平台 状态 操作
144 实时荧光定量PCR分析仪 动物遗传育种研究所公共实验室 可用 可预约 立即预约

预约历史

仪器编号 仪器品牌 仪器型号 仪器管理员 存放位置 基本费用 每小时费用
7 QIAGEN Rotor-Gene Q 贾先波 6-415 0.00 0.00

仪器介绍

Rotor-Gene Q 应用聚合酶链式反应(PCR)和高分辨率熔解分析(HRM),可进行高度精确的 real-time PCR, 终点法 PCR 和高分辨率熔解(HRM)分析, 该仪器非常适用于基因表达分析、 基因分型、 病原体检测和其他多种研究领域。功能强大、 界面友好的软件可让初始用户方便地使用, 也为高级用户提供开放式的实验仪器。

操作规范

简要操作流程

一、 程序启动:双击桌面“Rotor-Gene Q Series Software”图标,进入程序界面

二、 新建反应条件及保存实验模板

1、 选择对话框中的“Empty Run”,点击“New”按钮;

2、选择本次实验所使用的转子,在“Locking Ring Attached”前打“√”确认,点击“Next”按钮;

3、根据要求输入本次实验的操作人员“Operator”,实验中发生的异常情况如样本溶血等记入到“Note”中,在“Reaction Volume”中输入反应体积(注:careHBV v2及careHCV v2均为50ul)。点击“Next”进入下一步骤;

4、 点击“Edit Profile…”进入PCR反应条件建立;

5、根据说明书要求输入反应条件。点击“Insert After…”在跳出框中选择对点的条件,包括四程情况:Cycling,Melt,Hold at Temperature,HRM step,详细说明请参见仪器手册:

6、点击“Save as”将反应条件保存在自己熟悉的文件夹目录下,或者直接点击“OK”返回上一级图形界面;注:保存好的程序文件以后在本界面下按“Open”按钮打开调用。

7、点击“Gain Optimisation”进入增益优化界面;

8、在对话框中点击“Optimise Acquiring”按钮,在新跳出的对话框中按“OK”确认,如果实验中有设置n个荧光信号通道,就需要确认n次OK;在 “Perform Optimisation Before 1st Acquisition”前打“√”确认。按“Close”返回上级图形界面,然后按“Next”进入下一步;

9、点击“Save Template”按钮,将本次实验条件保存为模板文件,以供以后调用。保存的路径默认为安装路径下的Template文件夹中。点击“Start Run”按钮,输入本次实验名确认后进行实验运行阶段的样本编辑界面。文件建议保存在桌面HBV文件夹下;

三、 快速调用已存在的实验模板

1、进入程序软件后,可以看到前面保存的模板文件,直接双击打开或者点击“New”按钮;

2、选择本次实验所使用的转子,在“Locking Ring Attached”前打“√”确认,点击“Next”按钮;

3、点击“Next”按钮,直到进入最后一个界面,点击“Start Run”按钮,输入文件名后进入样本编辑界面;

四、样本编辑

在“Given Conc. Format”中选择自己喜欢的数字格式,在“Unit”中选择“IU/ml”为浓度单位。根据样品摆放的位置输入样本名称,将标准品的样品类型修改为“Standard”并输入对应的标准品浓度。如果每次实验的样本名称及顺序是固定的,可以点击将本次实验中编辑好的样本顺序保存下来,以供以后调用。调用时在本页面下点击打开所保存的文件。

如果一次实验中包括不同的检测项目如CT/NG/UU等,可以点击Page下的“New”按钮为每个项目建立不同的页面,并为不同页面命名。结束后点击“Finish”按钮退出编辑界面。

如果点击了“Finish and Lock Samples”按钮,样本信息会被锁定。点击“Edit Samples”按钮,进入样本编辑界面,点击“Security”下的“Samples Locked”进入解锁。

五、实验结果分析

实验运行结束后,软件自动会跳出分析界面。

对于careHBV v2和careHCV v2两个项目,由于试剂采用了内对照进行假阴性样本的监测,实验中的Green及Yellow通道中都会有相应的数据,我们需要对这两个通道进行依次分析。

上述界面,点击“Auto Scale”按钮会将扩增曲线自动放大到与坐标相适应,以方便观察。

1、 IC通道(Yellow)分析:

点击“Analysis”按钮,在跳出的对话框中双击“Cycling A. Yellow”或选中后点击“Show”

点击“Dynamic Tube”——“Slope Correct”,点击“Threshold”,并在曲线分析界面上任意处点击一下,红色阈值线就会出现在图形界面中,将该线调整到刚好盖过噪音线的位置即可。对于图中的无规律样本,将鼠标移到对应的曲线上,可以显示出样本的位置和名称,请将这些无规律样本的名称记录下来以备用;

2、 FAM通道(Green)分析:

在些页面中双击“Cycling A.Green”或选择后单击“Show”,进入FAM分析界面,分析的流程同IC分析方法。点击“Arrange”按钮进行界面重排。、

双击“Quant.Results-Cycling A.Green”页面,可以对所有样本的实验结果进行预览。重点关注实验中的室内质控品结果及IC分析中所记录的无规律样本。如果这些无规律样本对应的实验结果高于1E6,则可以忽略IC的不良表现;如果无定量结果,则这些样本中可能存在扩增抑制物,存在假阴性的风险;如果定量结果低于1E6,则可能存在结果偏低的现象。对后两类样本建议稀释提取好的核酸后复查。

六、 生成实验报告及打印

点击按钮进入报告页面,在Report Categories下选择“CyclingA.Green”,在Templates下双击“Quantitation (Standard Report)”, 或选择后点击“Show”按钮。点击“Print”按钮进行报告打印。